环粤港澳大湾区城市自行车挑战赛分专业组、业余组和大众组，专业组参赛必须到参赛城市自行车协会报名组队参赛。各城市车队车手国籍不限，籍贯不限，技术级阶不限，男女不限，年龄不限，但运动员必须具备专业技术水平和竞技能力。所有城市车队队员报名后，由各参赛城市报送赛事组委会备案核准。
各参赛城市可组建多支车队参赛，每支车队限6~10名车手。车队必须以城市名称命名车队主名，其次可在城市主名后面加以车队辅名或赞助商冠名。如“广州羊城队“。